哈工大《做作光子学》发文,成像技术再获妨碍!

 人参与 | 时间:2024-10-30 15:22:55

哈工大全媒体(张德龙 文/图)克日,哈工获妨哈工大仪器学院青年教授李浩宇团队在生物医学超分说显微成像技术规模取患上突破性妨碍。作光针对于当初超分说显微镜所面临的学发像技成像通量限度,团队提出基于合计光学成像的文成新一代高通量三维动态超分说率成像措施 ,经由合计成像技术增强荧光涨落探测锐敏度 ,术再使探测锐敏度提升两个数目级以上,哈工获妨突破了现有显微成像技术在高通量视场、作光地面央分说率以及高光阴分说率等难以统筹的学发像技难题 ,将当初天下上超分说显微镜中最高通量视场成像规模提升至毫米级,文成可在10分钟内对于搜罗逾越2000个细胞的术再视场上实现为了128纳米的超地面央分说率成像,为细胞学异质性以及生物医学等钻研提供新的哈工获妨迷信影像仪器 。

6月15日,作光该钻研下场以《经由增强荧光涨落检测实现高通量超分说率成像》(Enhanced detection of fluorescence fluctuations for high-throughput super-resolution imaging)为题 ,学发像技以长文方式在线宣告于国内威信杂志《做作光子学》(Nature Photonics,文成2021年影响因子39.7,术再光学类最高) ,这是哈工大初次在该刊物上以第一通讯单元宣告论文。

超分说成像技术的泛起标志着成像规模对于光学衍射极限的突破  ,也极大地增长了生物医学规模的睁开。运用超分说技术,生物学家患上以对于病态细胞内的亚细胞妄想妨碍精准的量化统计以及直不雅的可视化合成。可是,罕有的超分说技术每一每一需要重大的图像收集配置装备部署以及特定的成像操作,而且光阴分说率低  ,成像通量缺少 ,这限度了超分说成像在生物医学中的普遍运用。基于荧光涨落物理特色的超分说成像技术(Super-resolution optical fluctuation imaging ,SOFI)是一种典型的基于统计学的超分说措施 ,可能在不借助格外光学元件的条件下突破衍射极限 。但传统的SOFI技术每一每一需要1000帧以上的原始图像用于重修,自2009年提出至今依然难以知足生物医学中对于大视场以及细胞器刹时动态等钻研的高通量成像需要。

为了处置上述下场 ,李浩宇团队提出了自相关两步解卷积超分说成像(Super resolution imaging based on Auto Correlation with two-step Deconvolution ,SACD) 。差距于传统SOFI需要统计大批的原始图像  ,SACD经由增强图像中的可探测荧光涨落特色,在每一帧图像中提取更多实用信息以实现超分说成像 。SACD在合计超分说统计量前对于原始图像妨碍预解卷积,这一配合的处置增强了荧光信号的开关比力度,更高效地运用信息 ,从而缩减了重修所需的原始图像数目 。随后再将解卷积作为后处置步骤 ,进一步提升空间分说率。最终,SACD可能将重修所需原始图像数目缩减两个数目级以上,并使空间分说率提升逾越两倍多,知足了生物医学钻研的高通量成像需要 。

高通量成像——大视场细胞骨架微管成像

钻研团队将SACD措施运用于转盘共焦(Spinning Disk Confocal ,SDC)零星  ,实现为了对于毫米级(2毫米×1.4毫米)视场内微管的高通量超分说成像,搜罗多达2000个细胞。传统SOFI需要简直半天的不断采样能耐对于整块地域实现重修,而SACD惟独10分钟即可抵达愈加优异的成像功能 。在恣意地域中,SACD都坚持了极高的分说率,可能清晰地分说临近的微管妄想,剖析出转盘共焦显微零星无奈患上到的高频信息。

活细胞永劫程成像——活细胞线粒体外膜动态成像

为了克制低信噪比与永劫程的活细胞成像条件,李浩宇团队在SACD的根基上引入了以前开拓的浓密解卷积技术(该团队于去年宣告在《做作生物技术》期刊上 ,Weisong Zhao et al. ,Nature Biotechnology ,40,606–617 ,2022) 。Sparse-SACD使快捷而重大的细胞器动态历程患上以可视化 ,实如今逾越10分钟的光阴内对于COS-7活细胞线粒体妨碍快捷动态成像。患上益于该技术的高通量与晃动性,线粒体被剖析为中空的膜状细胞器,全部细胞中线粒体的裂变以及融会历程都被清晰地记实下来 。

最后,钻研者运用SACD技术妨碍了全活细胞四维超分说成像 ,即在逾越10分钟光阴(成像温度37°C)内对于COS-7活细胞的线粒体外膜收集妨碍三维超分说体成像(下图) 。与传总共焦零星比照 ,精粗妄想的可见性患上到了基本性后退,线粒体被清晰地成像为犀利的中空膜妄想。经由浓密性以及不断性的双重约束 ,SACD高保真地实现为了随光阴变更的全细胞线粒体裂变与融分解像。

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图为活体四维超分说成像 。转盘共焦显微镜(SD-confocal ,左)以及Sparse-SACD(右)在37°C下对于Skylan-S-TOM20标志的活COS-7细胞妨碍四维成像。比例尺 :5微米。

抽象地说,扩散在荧光布景中的单个份子晃动信号就像“迷雾中闪灼的星星” ,SACD在合计统计量以前尽可能地消除了这种“迷雾” ,以便在真正的心理情景下实现高品质的超分说成像。经由短缺运用原始图像中的荧光涨落信息,SACD突破了现有超分说技术的通量限度以及需要特殊光学操作的配置装备部署限度,同时还可能直接运用于现有商业化共焦荧赫然微镜零星(或者其余任何荧光零星)中,有助于低老本、高通量地妨碍相关生物医学钻研 ,有望成为生物学家合成细胞妄想以及瞬态能源学的老例仪器。

值患上一提的是 ,SOFI技术的缔造者、德国乔治-奥古斯都-哥廷根大学教授安德雷恩(J.Enderlein)是该使命的审稿人之一 。安德雷恩教授展现 :“在涨落合成之行妨碍预解卷积的想法很别致 ,颇为公平,由于这理当是消除了虚伪涨落的好措施”“运用这种技术泛起的图像品质颇为宜”“我以为所提出的措施会是更优的” 。

哈工大李浩宇教授以及北京大学陈良怡教授为论文的通讯作者;哈工大助理教授赵唯淞为论文的第一作者,论文配合第一作者还搜罗北京大学赵士群副钻研员 、哈工大博士钻研生韩镇谦厚丁相妍,论文的配合通讯作者还搜罗哈工大丁旭旻教授以及北京大学郭长亮副钻研员 。哈工大谭久彬院士为论文配协作者以及哈工大科研团队负责人。该项钻研下场主要由哈工大仪器学院以及北京大学未来技术学院相助实现 ,哈工大为论文第一通讯单元  。

原文链接:https://www.nature.com/articles/s41566-023-01234-9

(原问题:仪器学院李浩宇教授团队突破高通量超分说显微成像难题 钻研下场在《做作光子学》宣告)

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